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動物細胞株瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的區(qū)別
更新時間:2022-09-05   點擊次數(shù):1901次
  通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的培養(yǎng)物稱為細胞株。
  
  動物細胞株是用單細胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法,由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。
  
  原代培養(yǎng)的細胞一般傳至10代左右就不容易傳下去了,細胞的生長就會出現(xiàn)停滯,大部分細胞衰老死亡。但是有少數(shù)的細胞能夠度過“危機”而繼續(xù)傳下去,這些存活的細胞一般能夠傳到40~50代,這種傳代細胞叫做細胞株。
  
  瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的區(qū)別:
  
  瞬時轉(zhuǎn)染:外源片段的表達時間短暫。這主要是因為外源導(dǎo)入的裸露的載體整合入基因組的幾率非常低,所以以染色體外形式存在,不能隨細胞分裂而一同復(fù)制導(dǎo)致拷貝數(shù)被稀釋導(dǎo)致的。
  
  而且考慮到細胞分裂會稀釋質(zhì)粒的量,所以起初轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒拷貝數(shù)高。這就導(dǎo)致瞬時轉(zhuǎn)染呈現(xiàn)一個高拷貝到低拷貝迅速降低的過程,且無法在這個系統(tǒng)上實現(xiàn)可誘導(dǎo)表達。
  
  穩(wěn)定轉(zhuǎn)染:是相對瞬時轉(zhuǎn)染而言,進入細胞的質(zhì)粒整合入細胞基因組中,并能隨細胞分裂穩(wěn)定傳遞下去。在這個系統(tǒng)中,質(zhì)粒表達穩(wěn)定,拷貝數(shù)低,且能實現(xiàn)誘導(dǎo)表達。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染并不是一種與瞬時轉(zhuǎn)染不同的方法,只是對瞬時轉(zhuǎn)染的細胞進行篩選,得到穩(wěn)定整合的動物細胞株。
  
  穩(wěn)定整合的幾率因基因傳遞的方法而異,跨度可以從10^-8到10^-1。因此,對于有的轉(zhuǎn)染方法,比如化學(xué)試劑介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染,其整合幾乎可以忽略不計。質(zhì)粒載體整合的位點并不是*隨機分布,依據(jù)不同的基因傳遞方法,呈現(xiàn)不同的靶向傾向性,所以是一種半隨機整合。
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