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細(xì)胞的復(fù)蘇
更新時間:2010-06-04   點(diǎn)擊次數(shù):6344次

細(xì)胞的復(fù)蘇

 
細(xì)胞復(fù)蘇的原則-快速融化:必須將凍存在-196℃液氮中的細(xì)胞快速融化至37℃,使細(xì)胞外凍存時的冰晶迅速融化,避免冰晶緩慢融化時進(jìn)入細(xì)胞形成再結(jié)晶,對細(xì)胞造成損害。

一. 實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:

1.將水浴鍋預(yù)熱至37℃

2.用75%酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺臺面。

3.在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養(yǎng)瓶等等。
    二.取出凍存管:

1.根據(jù)細(xì)胞凍存記錄按標(biāo)簽找到所需細(xì)胞的編號。

2.從液氮罐中取出細(xì)胞盒,取出所需的細(xì)胞,同時核對管外的編號。
    三.迅速解凍:

1.迅速將凍存管投入到已經(jīng)預(yù)熱的水浴鍋中迅速解凍,并要不斷的搖動,使管中的液體迅速融化。

2.約1-2min后凍存管內(nèi)液體*溶解,取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁,再拿入超凈臺內(nèi)。
    四.平衡離心:用架盤天平平衡后,放入離心機(jī)中3000r/min 離心3min 
    五.制備細(xì)胞懸液:

1.吸棄上清液。

2.向離心管內(nèi)加入10ml培養(yǎng)液,吹打制成細(xì)胞懸液。
    六.細(xì)胞計(jì)數(shù):細(xì)胞濃度以5×105/ml為宜。
    七.培養(yǎng)細(xì)胞:

將復(fù)合細(xì)胞計(jì)數(shù)要求的細(xì)胞懸液分裝入培養(yǎng)瓶內(nèi),將培養(yǎng)瓶放入37℃5%CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)2-4小時(或者24-48小時)后換液繼續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng),換液的時間由細(xì)胞情況而定。

初學(xué)者易犯錯誤:

1水浴鍋未預(yù)熱或者未預(yù)熱到37℃。

2.水浴鍋內(nèi)凍存管太多,導(dǎo)致傳熱不佳,使融化時間延長。

3.離心前忘記平衡,導(dǎo)致離心機(jī)損壞和細(xì)胞丟失。

4.一次復(fù)蘇細(xì)胞過多,忘記更換吸頭和吸管,導(dǎo)致細(xì)胞交叉污染。
 
 
 

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