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ELISA試劑盒操作條件大盤點
更新時間:2014-06-27   點擊次數:1038次

    ELISA試劑盒可用于測定抗原,也可用于測定抗體。該法適于測定細胞培養(yǎng)上清、血清、血漿及組織液中的樣本,干擾小可以測到每毫升納克水平的細胞因子(或受體)的水平。在這種測定方法中有3種必要的試劑:①固相的抗原或抗體,②酶標記的抗原或抗體,③酶作用的底物。

ELISA試劑盒操作步驟

ELISA試劑盒使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。
根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應孔內。
加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。ELISA試劑盒重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。
在450nm波長處測定各孔的OD值。
根據ELISA試劑盒試劑的來源和標本的性狀以及檢測的具備條件,可設計出各種不同類型的檢測方法。  
(一)雙抗體夾心法
(二)雙位點一步法
(三)間接法測抗體
(四)競爭法
(五)捕獲法測IgM抗體
(六)應用親和素和生物素
ELISA試劑盒普遍用作非放射性同位素的成鍵化驗. 在這種方法中, 通常標準配體是固定的, 通過加入溶液相受體或蛋白質來使之成鍵. ELISA試劑盒通過加入與受體特異性反應的抗體來定量成鍵的受體, 而且zui初抗體的量以加入第二種能顯色的抗體測量. 第二種抗體能識別抗體的末端, 在其末端的堿性磷酸酯或過氧化物酶等與酶發(fā)生反應, 從而使溶液顯色.

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