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ELISA試劑盒的比色測(cè)定抗體含量
更新時(shí)間:2016-07-20   點(diǎn)擊次數(shù):2115次

    目前常用的幾種ELISA試劑盒方法有:測(cè)定抗體的間接法,測(cè)定抗原的雙抗體夾心法和測(cè)定抗原的競(jìng)爭(zhēng)法等。本實(shí)驗(yàn)采用間接法測(cè)定單克隆抗體效價(jià)。其主要過(guò)程為:首先將已知定量抗原吸附在聚苯乙烯微量反應(yīng)板的凹孔內(nèi),加待測(cè)抗體,保溫后洗滌以除去未結(jié)合的雜蛋白質(zhì),加酶標(biāo)抗抗體,保溫后洗滌,加底物保溫30分鐘后,加酸或堿終止酶促反應(yīng),用目測(cè)或光電。

三、操作步驟

①抗原包被:兔抗人IgG ELISA試劑盒作為抗原,用包被液l:8000稀釋?zhuān)?00μL/孔加入聚苯乙烯96孔反應(yīng)板中。4℃放置過(guò)夜。

②洗滌:次日傾去凹孔內(nèi)的液體,洗滌液洗3次。

③封閉:加l00μL/孔封閉液,室溫放置0.5h.

④洗滌:用洗滌液洗3次。

⑤加待測(cè)樣品(一抗):將含單克降抗體的細(xì)胞培養(yǎng)上清在另-塊板上用PBS 連續(xù)稀釋(按照1:2或1:10),100μL /孔加到 已包被的板上,每個(gè)樣品平行做兩份,PBS 或空白培養(yǎng)基作為陰性對(duì)照,已知樣品作為陽(yáng)性對(duì)照。加蓋37℃恒溫箱溫育 1~2h。

⑥洗滌:用洗滌液洗3次。

⑦加酶標(biāo)抗抗體:兔抗鼠IgG-HRP,用封閉液l :8000稀釋?zhuān)?00μL/孔,加蓋37℃恒溫箱溫育1h。

⑧洗滌:用洗滌液洗5次,蒸餾水洗2次。

⑨顯色:加新鮮配制的底物溶液100μL/孔,室溫暗處放置5~30min,顯示藍(lán)色。

⑩終止反應(yīng)、比色:加50μL/孔終止液。ELISA試劑盒顏色變黃;用酶標(biāo)儀測(cè)定450nm 處各孔的吸光值,陽(yáng)性反應(yīng)的zui大稀釋度為待測(cè) 樣品的效價(jià)。

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