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ELISA試劑盒規(guī)范曲線的制作關(guān)鍵簡述
更新時間:2017-01-11   點擊次數(shù):1633次

很多試劑檢查都涉及到規(guī)范曲線的疑問,ELISA試劑盒規(guī)范曲線做的好與壞會直接影響到試驗的成果,乃至是到試驗的成敗,那么終究怎么繪制或制造規(guī)范曲線呢?
一、做規(guī)范曲線樣品檢查時有幾個疑問需求注意
1、樣品的濃度等目標(biāo)是依據(jù)規(guī)范曲線計算出來的,所以首先要把做規(guī)范曲線看作是比做正式試驗還要主要的一件事,不然后邊的試驗成果無從談起。
2、設(shè)置規(guī)范曲線樣品的規(guī)范濃度規(guī)模要有一個對比大的跨度,而且要能包括你所要檢查試驗樣品的濃度,即樣品的濃度要在規(guī)范曲線濃度規(guī)模以內(nèi),人ELISA試劑盒包括上限和下限。而對于呈S型的規(guī)范曲線,盡量要使試驗樣品的濃度在中心斜度zui陡段,即曲線簡直成直線的規(guī)模內(nèi)。
3、選用倍比稀釋法制造規(guī)范曲線中的規(guī)范樣品濃度,ELISA試劑盒這么就能夠確保規(guī)范樣品的濃度不會出現(xiàn)較大的違背。
4、檢查規(guī)范樣品時,應(yīng)按濃度遞加順序進(jìn)行,以削減高濃度對低濃度的影響,進(jìn)步性。
5、規(guī)范曲線的樣品數(shù)通常為7個點,但zui少要確保有5個點。
6、做出的規(guī)范曲線相數(shù)因試驗要求不一樣而有所變化,但通常來說,相數(shù)Rzui少要大于0.98,對于有些試驗,zui少要0.99乃至是0.999.
二、ELISA試劑盒挑選啥方程去擬合
在S曲線的低濃度部分能夠用乘冪方程*的擬合,中低濃度部分能夠用直線方程,中心部分可用對數(shù)方程,而中后段可用四參數(shù)。免疫檢查時標(biāo)準(zhǔn)點(能夠是倍比稀釋的,也能夠不是)濃度假設(shè)和相應(yīng)的吸光度(OD)值假設(shè)能夠出現(xiàn)直線當(dāng)然是zui抱負(fù)的了,這時能夠經(jīng)過EXELL等利便的取得擬合曲線,進(jìn)而推算出樣品的濃度值。 
對于標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合辦法,直線、二次曲線、三次曲線、指數(shù)、對數(shù)等雖都可用于ELISA及其它生物學(xué)反響中的曲線擬合,但都只合用于曲線的一部分,有的合用于前半段,有的合用于后半段,有的合用于中心一段,而Logistic曲線則對曲線的悉數(shù)都有較好的合用性。在一個長的區(qū)間內(nèi),Logistic應(yīng)當(dāng)都能擬合得較為抱負(fù)。假設(shè)用來定量,S形曲線的中心段(較陡處)是對比好的,而兩真?zhèn)€平整部分計算誤差會大,有時乃至?xí)艽?。用于免疫檢查的所謂“標(biāo)準(zhǔn)曲線”真實稱為擬合曲線對比適宜?,F(xiàn)在上zui盛行的免疫檢查擬合辦法是“四參數(shù)邏輯擬合”,用這種擬合辦法通常能夠?qū)Ρ鹊姆从碀舛群臀舛鹊那€,從而進(jìn)一步對比的取得樣品中待測物質(zhì)的濃度值。但咱們做免疫檢查很少有時候能夠有這么抱負(fù)的情況,標(biāo)品濃度和相應(yīng)OD值通常是"S"型的曲線,這時就不能用直線擬合的辦法了,而對擬合辦法進(jìn)行挑選即是必要的了。
ELISA試劑盒樞紐在于你的標(biāo)準(zhǔn)曲線做到了S形的哪一部分,你想檢查的樣品濃度在曲線的哪一部分。ELISA試劑盒當(dāng)然,假設(shè)用于定量,仍是在中心一段較好。但建模型是一回事,而用它來定量是另一回事。這些辦法當(dāng)然沒有一種辦法能夠通用,但也都能夠用。但并不是說它即是的。事實上不僅是ELISA,其它良多生物學(xué)反響都是S形曲線,也都能夠用Logistic曲線擬合。

 

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