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我司分享細(xì)胞培育基防備污染的四大方法
更新時間:2020-09-09   點(diǎn)擊次數(shù):1834次

細(xì)胞培育基受各種霉菌、細(xì)菌和支原體污染后,一般都較難掃除或殺滅,其間以支原體更難掃除,因此從防備著眼為上。

一、抗生素除菌法:用BM-1(截耳素衍生物)和BM-2(四環(huán)素衍生物)抑制支原體。

1.抗生素制備:均可用PBS配成250×濃縮液-20℃?zhèn)溆谩?/p>

2.處理:取受支原體污染的細(xì)胞,吸除培育液,參加含BM-1的1640培育液培育3天后,吸除培育液,再參加含BM-2的1640培育液培育4天,如此連續(xù)三個輪回。

3.檢測:用33258熒光染色鏡檢(每個輪回末應(yīng)檢測一次)。

4.培育:鏟除支原體后的細(xì)胞,在不加上述抗生素的培育基液中,再傳代培育3~4次。

5.鏡檢:如鏟除不*可再進(jìn)行處理至純潔停止(一般3個輪回即能被*消除),即先用含BIP培育液培育12天后,再按上述方法處理。

二、加溫除菌法

把受污染的細(xì)胞置41℃中作用5~10小時。

三、動物體內(nèi)接種除菌法

把受支原體污染的腫瘤細(xì)胞接種在同種動物皮下或腹腔中,借動物免疫系統(tǒng)消除支原體,而腫瘤細(xì)胞卻能在體內(nèi)持續(xù)成長,待一定時間后,從體內(nèi)取出細(xì)胞培育基再進(jìn)行培育繁衍。

四、巨噬細(xì)胞吞噬法

從動物腹腔采取巨噬細(xì)胞,為掃除其它細(xì)胞成分,可先進(jìn)行純化,然后再參加被支原體污染的細(xì)胞培育液中混合培育。在培育過程中,為查看支原體是否已被消除潔凈,可利用支持物培育法驗(yàn)證,取出支持物逐日染色、鏡檢調(diào)查,至支原體已被消除潔凈停止。

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